Forskere:Hvordan autentificerer du dine ikke-menneskelige cellelinjer?

1. Morfologisk analyse :Dette involverer at undersøge cellelinjen under et mikroskop for at observere dens form, størrelse og vækstkarakteristika. Mens morfologisk analyse kan være nyttig til at identificere generelle træk ved en cellelinje, er det ikke altid tilstrækkeligt til endelig autentificering.

2. Immunfænotypning :Denne metode bruger antistoffer til at påvise tilstedeværelsen eller fraværet af specifikke overflademarkører eller intracellulære proteiner, der er karakteristiske for en bestemt celletype. Immunfænotypning kan udføres under anvendelse af teknikker såsom flowcytometri eller immuncytokemi.

3. Karyotyping :Denne teknik involverer at analysere kromosomtallet og strukturen af ​​en cellelinje. Karyotyping kan identificere kromosomale abnormiteter eller ændringer, der kan indikere kontaminering eller fejlidentifikation.

4. DNA-fingeraftryk :Denne metode involverer analyse af de unikke DNA-mønstre i en cellelinje ved hjælp af teknikker såsom kort tandemgentagelse (STR) profilering eller enkelt nukleotid polymorfi (SNP) analyse. DNA-fingeraftryk kan give et højt niveau af diskrimination og bruges i vid udstrækning til cellelinjeautentificering.

5. Artsspecifik PCR :Denne metode bruger polymerasekædereaktion (PCR) til at amplificere specifikke DNA-sekvenser, der er unikke for cellelinjens oprindelsesart. Artsspecifik PCR kan bruges til at detektere krydskontaminering eller fejlidentifikation af cellelinjer.

6. Isoenzymanalyse :Denne teknik involverer at analysere den elektroforetiske mobilitet af isoenzymer, som er varianter af enzymer, der adskiller sig i deres molekylære struktur og funktion. Isoenzymanalyse kan bruges til at identificere cellelinjekontamination eller fejlidentifikation baseret på forskelle i isoenzymmønstre.

7. Mycoplasma-testning :Mycoplasma er en type bakterier, der kan forurene cellekulturer og påvirke deres adfærd og eksperimentelle resultater. Mycoplasma-testning er afgørende for at sikre, at cellelinjer er fri for mycoplasma-kontamination.

Det er vigtigt at bemærke, at valget af godkendelsesmetode afhænger af den specifikke cellelinje og det krævede autentificeringsniveau. Nogle cellelinjer kan kræve flere autentificeringsmetoder for at sikre pålidelig identifikation og kvalitetskontrol. Derudover er korrekt dokumentation og registrering af autentificeringsprocessen afgørende for at bevare cellelinjernes integritet og sikre reproducerbarhed i forskning.