Hvilke første skridt tog forskere for at fremstille transgene bakterier, der lavede insulin?

1. Isolering af det humane insulingen:

* Identificering af genet: Forskere måtte først præcisere den nøjagtige DNA -sekvens, der koder for humant insulin. Dette involverede at studere det humane genom og forstå strukturen af ​​insulinproteinet.

* Kloning af genet: Når genet blev identificeret, brugte de teknikker som restriktionsenzymer og plasmider til at skære insulingenet fra humant DNA og indsætte det i et lille, cirkulært stykke DNA kaldet et plasmid. Dette skabte et rekombinant DNA -molekyle.

2. Valg af en passende bakterievært:

* e. coli som arbejdshest: Bakterien * Escherichia coli * (E. coli) blev valgt som værtsorganisme. Det er en godt studeret, let manipuleret og hurtigt reproducerende bakterie, hvilket gør den ideel til storstilet produktion.

3. Indsættelse af genet i bakterier:

* Transformation: Det rekombinante plasmid indeholdende det humane insulingen blev introduceret i E. coli -celler. Denne proces, kaldet transformation, involverede oprettelse af forhold, hvor bakterierne ville tage plasmidet op.

4. Valg af transgene bakterier:

* Antibiotikaresistens: Plasmidet indeholdt ofte et gen til antibiotikaresistens. Dette gjorde det muligt for forskere let at identificere bakterier, der med succes havde taget plasmidet op. De ville dyrke bakterierne i nærvær af antibiotikumet, og kun de bakterier med plasmidet ville overleve.

5. Udtrykker insulingenet:

* promotorer og regulering: Plasmidet blev designet, så det humane insulingen ville blive udtrykt (tændt) inde i E. coli. Dette involverede inklusive en promotorsekvens - en DNA -region, der beder bakteriemaskineriet om at begynde at læse og transkribere insulingenet.

6. Producerer og renser insulin:

* Storskala gæring: De transgene E. coli -bakterier blev dyrket i store fermenteringstanke, hvilket gjorde det muligt for dem at producere store mængder insulin.

* rensning: Efter fermentering skulle insulinet produceret af bakterierne renses fra resten af ​​bakteriekomponenterne. Dette involverede forskellige teknikker som kromatografi og filtrering.

Vigtig note: Dette er en forenklet oversigt. Processen involverede adskillige tekniske detaljer, iterationer og udfordringer, og mange strålende forskere bidrog til dens succes.