Hvordan er celler, der indeholder rekombinant DNA, valgt?

1. Antibiotikaresistensmarkører:

* princip: Denne metode er afhængig af at indsætte et antibiotikaresistensgen sammen med det ønskede gen i vektoren. Celler, der med succes optager den rekombinante vektor, får også resistens over for det specifikke antibiotikum.

* Procedure: Celler dyrkes på medier indeholdende antibiotikum. Kun celler, der har optaget den rekombinante vektor og udtrykker resistensgenet, vil overleve og danne kolonier.

* Eksempel: Det almindeligt anvendte ampicillinresistensgen (AMPR) gør det muligt for bakterier at overleve i nærvær af ampicillin.

2. Reportergener:

* princip: Reportergener koder for proteiner, der producerer et påviseligt signal, hvilket tillader let identifikation af celler indeholdende det rekombinante DNA.

* Procedure: Reportergener er ofte knyttet til det ønskede gen, så ekspression af reportergenet indikerer vellykket indsættelse af det rekombinante DNA.

* Eksempler:

* lacz -gen: Koder for beta-galactosidase, der nedbryder et substrat (X-gal) for at producere en blå farve.

* GFP -gen: Koderer grønt fluorescerende protein, hvilket får celler til at gløde grønt under UV -lys.

3. Farveudvælgelse:

* princip: Denne metode anvender et genetisk system, hvor tilstedeværelsen af ​​det rekombinante DNA ændrer cellernes farve.

* Procedure: Celler, der indeholder det rekombinante DNA, viser en anden farve sammenlignet med celler uden det.

* Eksempel: Den blå-hvide screeningsmetode bruger en vektor med LACZ-genet forstyrret af indsættelsesstedet for det rekombinante DNA. Celler med det rekombinante DNA vil producere hvide kolonier, mens celler uden det vil producere blå kolonier.

4. Komplementering:

* princip: Denne metode bruges, når det ønskede gen er påkrævet for at cellen skal overleve eller producere et specifikt produkt.

* Procedure: Celler, der mangler et funktionelt gen, transformeres med den rekombinante vektor, der indeholder genet. Kun celler med det funktionelle gen overlever eller producerer det ønskede produkt.

* Eksempel: En stamme af bakterier, der mangler et specifikt enzym, kan transformeres med en vektor, der indeholder genet, der koder for enzymet. Kun de transformerede bakterier vil være i stand til at overleve og vokse.

5. Fluorescensaktiveret cellesortering (FACS):

* princip: FACS anvender fluorescensmærkning til at identificere og sortere celler baseret på specifikke egenskaber.

* Procedure: Celler, der udtrykker det ønskede gen (knyttet til en fluorescerende markør), sorteres fra resten baseret på deres fluorescensegenskaber.

* Fordele: Screening af høj kapacitet, præcis separation og effektiv sortering af celler.

6. PCR -screening:

* princip: PCR kan bruges til at amplificere en specifik DNA -sekvens, hvilket bekræfter tilstedeværelsen af ​​det rekombinante DNA.

* Procedure: DNA ekstraheres fra celler og amplificeres under anvendelse af primere, der er specifikke for det indsatte gen. Tilstedeværelsen af ​​det amplificerede produkt indikerer vellykket indsættelse.

Valget af selektionsmetode afhænger af det specifikke eksperiment, den anvendte vektor og det ønskede resultat.