Hvor enkeltcelleklon kan opnås fra en kultur?

Metoder til opnåelse af enkeltcellekloner

1. fortyndingskloning (begrænset fortynding)

- princip: Fortynding af cellesuspensionen til en lav nok koncentration til, at individuelle celler er adskilt og udpladet i individuelle brønde eller pletter.

- procedure:

- 1. Forberedelse: Bestem den omtrentlige cellekoncentration af din kultur ved hjælp af et hæmocytometer eller celletæller.

- 2. Fortynding: Beregn den fortyndingsfaktor, der er nødvendig for at opnå en ønsket celletæthed (f.eks. 1 celle pr. Brønd). Fortynd din cellesuspension i overensstemmelse hermed.

- 3. Belægning: Plade de fortyndede celler i en plade med flere brønde (96-brønd, 24-brønd osv.) Eller på en petriskål.

- 4. Inkubation: Lad cellerne vokse og danne kolonier.

- 5. Valg: Identificer brønde eller områder med enkelte kolonier (en celle gav anledning til hele kolonien).

2. mikromanipulation (mikroskopisk selektion)

- princip: Brug af et mikroskop og en mikromanipulator til fysisk at samle en enkelt celle og overføre den til et nyt vækstmedium.

- procedure:

- 1. Forberedelse: Brug et mikroskop med en mikromanipulator.

- 2. Celleudvælgelse: Identificer en enkelt celle af interesse under mikroskopet.

- 3. Isolering: Brug forsigtigt mikromanipulatoren til at hente cellen.

- 4. Overførsel: Overfør cellen til et nyt vækstmedium (f.eks. En lille kulturskål eller en mikrotube).

- 5. Inkubation: Lad cellen vokse til en koloni.

3. flowcytometri-baseret sortering

- princip: Under anvendelse af et flowcytometer til sortering af celler baseret på specifikke egenskaber (f.eks. Størrelse, fluorescens).

- procedure:

- 1. Mærkning: Om nødvendigt er etiketceller med fluorescerende markører for at differentiere dem fra andre.

- 2. Sortering: Kør cellesuspensionen gennem flowcytometeret. Instrumentet analyserer og adskiller celler baseret på de specificerede parametre.

- 3. Samling: Saml celler af interesse i et nyt vækstmedium.

- 4. Inkubation: Lad cellerne vokse til kolonier.

Overvejelser til kloning af enkeltcelle

* Celletype: Forskellige celletyper har forskellige vækstegenskaber. Nogle er mere følsomme over for isolering end andre.

* Vækstmedium: Valget af kulturmedium er kritisk for at støtte encellevækst.

* klonens renhed: Sørg for, at de valgte kolonier stammer fra en enkelt celle.

* Tid: Kloning kan tage tid, da enkeltceller er nødt til at formere sig til en koloni.

* applikationer:

- Cellelinieudvikling: Oprettelse af rene cellelinjer med specifikke egenskaber.

- Narkotikascreening: Test af lægemiddeleffekter på individuelle celler.

- genetisk forskning: Undersøgelse af genekspression og mutationer på enkeltcelleniveau.

Lad mig vide, om du vil have flere detaljer om nogen af disse metoder eller have spørgsmål om specifikke applikationer!