Nitrogenase-enzymkomplekset består af to metalloenzymer:molybdæn-jern (MoFe) proteinet og jern-svovl (FeS) proteinet. MoFe-proteinet huser det aktive sted, hvor N2-reduktion forekommer, mens FeS-proteinet fungerer som en elektrondonor og ATP-hydrolyserende enhed.
Nitrogenbinding:
1. Substratadgang: Det aktive nitrogenase-sted er dybt begravet i MoFe-proteinet, hvilket skaber et beskyttende miljø for den delikate N2-reduktionsproces. En række aminosyrerester og en molybdæn-cofaktor (MoFe7S9C-homocitrat) danner "FeMo-cofaktoren", som tjener som bindingsstedet for N2.
2. Svag binding: Nitrogen binder reversibelt til FeMo cofaktoren gennem en "side-on" interaktion, hvor N-N tripelbindingen er parallel med FeMo klyngen. Denne svage binding muliggør den nødvendige mobilitet og aktivering af N2.
Nitrogenreduktion:
1. ATP-hydrolyse: FeS-proteinet hydrolyserer ATP for at give energi til nitrogenreduktionsprocessen. Denne hydrolyse genererer en højenergielektron, der overføres til MoFe-proteinet.
2. Elektronoverførsel: Højenergielektronen reducerer en række jern-svovl-klynger i MoFe-proteinet, hvilket i sidste ende leverer elektronen til FeMo-kofaktoren.
3. Protonation og reduktiv spaltning: Den reducerede FeMo-kofaktor interagerer med protoner (H+) fra det omgivende miljø. Disse protoner deltager sammen med elektronerne i en række protonationsreduktionstrin, der fører til spaltningen af N-N-tredobbeltbindingen. Denne proces resulterer i dannelsen af to NH3-molekyler.
Nitrogenasemekanismen involverer flere cyklusser af ATP-hydrolyse, elektronoverførsel og protonationsreduktionsreaktioner. Hver cyklus bringer N2 tættere på fuldstændig reduktion, hvilket til sidst giver to molekyler ammoniak. Enzymkomplekset gennemgår også en række konformationelle ændringer under den katalytiske cyklus, som letter substratbinding, elektronoverførsel og produktfrigivelse.
På trods af de betydelige fremskridt, der er gjort i forståelsen af nitrogenase, er der stadig aspekter af dens mekanisme, der mangler at blive fuldt belyst. Yderligere forskning har til formål at give en mere detaljeret redegørelse for de indviklede trin involveret i nitrogenreduktion og regulering af nitrogenaseaktivitet, hvilket bidrager til vores forståelse af denne vitale biologiske proces.