Hvordan ekstraherer saltsæbe og ethanol DNA?

1. Cellelyse:

- Saml dine materialer, som omfatter en prøve af celler (plante- eller dyrevæv), salt, flydende opvaskesæbe og en DNA-ekstraktionsbuffer (TE-buffer eller Tris-EDTA-buffer).

- Læg et lille stykke af vævsprøven i en morter og støder eller en lille beholder med låg.

- Tilsæt en lille mængde salt til prøven (ca. 1/4 teskefuld pr. 1 gram væv).

- Tilsæt et par dråber flydende opvaskemiddel til blandingen og mal eller mos vævet grundigt.

- Dette trin bryder cellemembranerne op og frigiver DNA'et.

2. Proteinudfældning:

- Overfør lysatet (blandingen af ​​knækkede celler) til et centrifugerør.

- Tilsæt et volumen kold DNA-ekstraktionsbuffer svarende til volumenet af lysatet. Bland grundigt.

- DNA-ekstraktionsbufferen indeholder detergenter, der hjælper med at opløse cellemembraner og proteiner, samt en saltopløsning, der hjælper med at præcipitere proteiner (inklusive histoner forbundet med DNA) ud af opløsningen.

- Proteinerne danner en klump og skiller sig fra DNA'et.

3. DNA-udfældning:

- Centrifuger blandingen i et par minutter ved høj hastighed (omkring 12.000–15.000 rpm).

- Dette vil få de udfældede proteiner og celleaffald til at danne en pellet i bunden af ​​røret, hvilket efterlader DNA'et i supernatanten (væsken over pelleten).

4. DNA-indsamling:

- Fjern forsigtigt supernatanten, som indeholder DNA'et, i et nyt rør.

- Undgå at overføre noget af pelleten, da den for det meste indeholder protein og celleaffald.

- DNA'et er nu i en forholdsvis ren form, fri for de fleste cellulære komponenter og proteiner.

Ethanolekstraktion:

1. DNA-udfældning:

- Til røret, der indeholder DNA-opløsningen fra saltsæbeekstraktionen, tilsættes en tilsvarende mængde kold 95%-100% ethanol.

- Bland forsigtigt ved at vende røret flere gange. Lad være med at vortex, da dette kan skære DNA'et.

- DNA'et vil begynde at præcipitere ud af opløsningen som en hvid, trævlet masse.

2. DNA-vask:

- Centrifuger blandingen i et par minutter ved høj hastighed (omkring 12.000–15.000 rpm).

- DNA'et vil danne en pellet i bunden af ​​røret. fjern forsigtigt supernatanten (ethanolopløsningen) uden at forstyrre pelleten.

3. DNA-tørring:

- Skyl forsigtigt DNA-pillen med kold 70 % ethanol for at fjerne eventuelle resterende salte.

- Centrifuger kort for at opsamle DNA'et i bunden af ​​røret.

- Fjern forsigtigt ethanolen uden at forstyrre pelleten.

- Lad DNA-pillen lufttørre i et par minutter.

4. DNA-resuspension:

- Tilføj en lille mængde DNA-ekstraktionsbuffer (TE-buffer eller Tris-EDTA-buffer) til røret, der indeholder DNA-pellet.

- Brug en mikropipette til forsigtigt at resuspendere DNA'et ved at pipettere op og ned, indtil det er helt opløst.

- DNA'et er nu klar til yderligere analyse, såsom PCR, gelelektroforese eller andre molekylærbiologiske teknikker.

Begge metoder sigter mod at forstyrre cellemembranen, frigive DNA og derefter adskille DNA'et fra andre cellulære komponenter gennem udfældning og centrifugering. De giver en enkel og omkostningseffektiv måde at udvinde DNA til grundlæggende eksperimenter og undervisningsformål.