Hvordan tilbereder man fosfatbuffer med pH 7,5?

Materialer:

1. Deioniseret vand

2. Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)

3. Natriumhydrogenphosphat (Na2HPO4)

4. pH-meter

5. Magnetisk omrører eller rørestang

6. Målekolbe (f.eks. 1000 ml)

7. Gradueret cylinder eller pipette

Reagenser:

1. 0,2 M kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4) opløsning:Opløs 17,41 g KH2PO4 i 1000 ml deioniseret vand.

2. 0,2 M natriumhydrogenphosphat (Na2HPO4) opløsning:Opløs 28,48 g Na2HPO4 i 1000 ml deioniseret vand.

Procedure:

1. Beregn mængderne af 0,2 M KH2PO4- og 0,2 M Na2HPO4-opløsninger, der er nødvendige for at fremstille 1000 ml 0,1 M phosphatbuffer ved pH 7,5. Brug Henderson-Hasselbalch-ligningen:

pH =pKa + log ([A-]/[HA])

hvor:

- pH er den ønskede pH (7,5)

- pKa er dissociationskonstanten for fosforsyre (7.21)

- [A-] er koncentrationen af ​​den konjugatbase (Na2HPO4)

- [HA] er koncentrationen af ​​den svage syre (KH2PO4)

Omarrangering af ligningen og erstatning af værdierne:

log ([A-]/[HA]) =pH - pKa =7,5 - 7,21 =0,29

[A-]/[HA] =antilog (0,29) =1,959

Ud fra den ønskede bufferkoncentration (0,1 M) og det beregnede forhold ([A-]/[HA]) bestemmes mængderne af 0,2 M KH2PO4- og 0,2 M Na2HPO4-opløsninger:

V (KH2PO4) =[HA] / [Total koncentration] * Total volumen

=0,1 M/(0,1 M + 0,1 M) * 1000 ml

=500 ml

V (Na2HPO4) =[A-] / [Total koncentration] * Total volumen

=0,1 M/(0,1 M + 0,1 M) * 1000 ml

=500 ml

2. Overfør 500 mL 0,2 M KH2PO4-opløsning til en 1000 mL målekolbe.

3. Tilsæt 500 ml 0,2 M Na2HPO4-opløsning til målekolben.

4. Rør forsigtigt kolben rundt for at blande opløsningerne.

5. Tjek bufferens pH ved hjælp af et pH-meter. Juster pH-værdien til 7,5 ved at tilsætte små mængder af enten 0,2 M KH2PO4- eller 0,2 M Na2HPO4-opløsninger efter behov.

6. Tilsæt om nødvendigt deioniseret vand for at bringe bufferens endelige volumen op på 1000 ml.

7. Bland bufferen grundigt med en magnetomrører eller omrørerstang.

Din 0,1 M fosfatbuffer med pH 7,5 er nu klar til brug. Opbevar bufferen ved den passende temperatur til dine eksperimentelle forhold.