Hvordan udfælder vandigt ammoniumsulfat proteiner?

1. Hydrofobe interaktioner:

* Proteiner er typisk opløselige i vand på grund af deres hydrofile (vandelskende) grupper, der danner brintbindinger med vandmolekyler.

* De indeholder imidlertid også hydrofobe (vandfrydende) grupper, der har tendens til at klynge sig sammen.

2. Ammoniumsulfats indflydelse:

* Når ammoniumsulfat tilsættes til en proteinopløsning, interagerer det med vandmolekylerne, hvilket effektivt fjerner dem væk fra proteinets hydrofile grupper.

* Denne forstyrrelse af hydratiseringsskaller omkring proteinet udsætter de hydrofobe grupper.

3. Aggregering og nedbør:

* Når koncentrationen af ​​ammoniumsulfat øges, bliver de hydrofobe grupper på forskellige proteinmolekyler mere eksponeret og interagerer med hinanden, hvilket fører til aggregering.

* Til sidst bliver disse aggregater store nok til at blive uopløselige og udfælder ud af opløsningen.

Faktorer, der påvirker nedbør:

* Proteinkoncentration: Højere proteinkoncentrationer kræver højere ammoniumsulfatkoncentrationer til nedbør.

* Proteintype: Forskellige proteiner har forskellige grader af hydrofobicitet, hvilket fører til forskellige følsomheder over for ammoniumsulfatudfældning.

* ph: Opløsningens pH -værdi kan påvirke ladningen af ​​proteinet og dets interaktion med ammoniumsulfat.

* Temperatur: Højere temperaturer forbedrer generelt proteinopløselighed, hvilket kræver højere ammoniumsulfatkoncentrationer til nedbør.

Anvendelser af ammoniumsulfatudfældning:

* Proteinoprensning: Det er en almindelig teknik til at koncentrere og delvis rense proteiner fra komplekse blandinger.

* Krystallisation: Ammoniumsulfat kan bruges til at fremme proteinkrystallisation, som er afgørende for strukturelle studier.

Fordele ved anvendelse af ammoniumsulfat:

* Relativt billig og let tilgængelig.

* Generelt ikke-denaturerende for proteiner, hvilket betyder, at det ikke ødelægger deres oprindelige struktur.

* Tillader selektiv nedbør baseret på proteinegenskaber.

Overvejelser:

* Det er vigtigt at optimere ammoniumsulfatkoncentrationen for hvert specifikt protein og det ønskede resultat.

* Bundfaldet kan indeholde andre molekyler udover målproteinet, hvilket kræver yderligere oprensningstrin.

* Nogle proteiner kan være følsomme over for høje saltkoncentrationer.

Afslutningsvis er ammoniumsulfatudfældning en værdifuld teknik til at adskille og rense proteiner ved at udnytte forskellene i deres hydrofobe interaktioner og opløselighed i nærvær af høje saltkoncentrationer.