Sådan måles bakteriel vækst i petriskåle

Bakterier dyrkes i petriskåle på et fast medium kendt som bakteriel agar, hvor hevede, cirkulære kolonier dannes. I modsætning til en individuel bakteriecelle er en koloni en gruppe bakterier, der er store nok til at være synlige for det blotte øje. Bakteriel vækst kan måles ved simpel observation af hvor mange kolonier der er til stede; Imidlertid omfatter flere kvantitative metoder brugen af ​​et tællekammer eller oftere levedygtige tallerkener. Sidstnævnte bruges mest hyppigt, da det også giver kvalitative oplysninger, såsom virkningen af ​​forskellige vækstbetingelser. Da der kan være milliarder bakterier i en petriskål, må først måles fortynding af prøven, så det er muligt at tælle antallet af kolonier.

I et reagensglas tilsættes 10 mikroliter af den startende bakteriekultur til 90 mikroliter fortyndingsmedium. Luk låget af røret stramt og vortex forsigtigt for at opnå en homogen blanding. Nu er prøven en tiendedel af sin oprindelige koncentration.

Overfør 10 mikroliter af denne nye prøve til et nyt reagensglas indeholdende 90 mikroliter fortyndingsmedium, bland det igen. Endnu en gang vil resultatet blive yderligere fortyndet - nu vil det være en hundrededel af dets oprindelige koncentration. Gentag dette flere gange, indtil den oprindelige prøve er blevet fortyndet mellem 10 ^{4 og 10 10 gange. Sørg for, at hvert rør er mærket med den rigtige fortynding, f.eks. 10 -1, 10 -2 og så videre.}

Spild 10 mikroliter af den sidste fortynding færdig på agarpladen. Ved hjælp af spredningskanten fordeles bakterieløsningen over hele overfladen af ​​agarpladen. Gentag dette for to flere plader. Det er også almindeligt at udføre disse trin med andre niveauer af fortynding til sammenligning. Sørg for at mærke bundpladerne på pladerne. Udskift lågene på hver plade og lad agarpladerne tørre i flere minutter enten på laboratoriebænken under en flamme eller i en inkubator. Placer pladerne i inkubatoren, som skal indstilles til den passende temperatur for bakteriestammen. Lad være med at vokse i 12 til 16 timer.

Kolonier skal være synlige efter 16 timer; dog kan nogle genetiske modifikationer kræve længere (for eksempel farveudvikling). Når kolonier er observerbare, tag pladerne ud og find dem, der har mellem 30 og 300 kolonier. Ved hjælp af en permanent markør skal du placere en prik på bunden af ​​petriskålen - siden med agar, ikke låget - hvor en koloni er synlig gennem agar. Tæl hver markør prikk. Gentag for hver skål.

For at måle mængden af ​​bakterier i startkulturen til dette forsøg, skal fortyndingen omdannes i beregningerne på to steder. For det første tog du en tiendedel af den fortyndede prøve, når du tog en mikroliter fra reagensrøret for at sætte i petriskålen, så du skal multiplicere alt med 10 for at vende det. Hvis fortyndingsfaktoren i reagensrøret for eksempel var 10 ^{-7, skal antallet af kolonier multipliceres med 10 7 for at vende fortyndingseffekten. Du skal blot fjerne det negative tegn fra eksponenten i beregningerne. Brug formlen:}

[Antallet af kolonier talt] × 10 × [hvor mange gange skal prøven multipliceres for at komme til den oprindelige koncentration: for eksempel 10 ^{5] = Antal kolonidannende enheder (CFU) pr. Milliliter udgangskultur. Dette er bakterievæksten i dine petriskåle.}

TL; DR (for lang tid, ikke læst)

Sørg for at sterilisere glasprederen ved at dyppe spredekanten i 70 procent ethanol og indsætte det i en Bunsen brænderflamme. Lad etanolet brænde og langsomt forbrænde alkoholen, hvilket vil dræbe al bakterieforurening. Rør forsigtigt den til det tørre (det vil sige ingen bakterier) del af agaret for at afkøle det - agaret må ikke smelte på kontakt.

Advarsel

Behandle bakterier som om det er potentielt patogen, og brug korrekt laboratorie sikkerhedsprocedurer.