Hvad er funktionerne af natriumperchlorat i genomisk DNA-isolering fra humant blod?

1. Hæmning af DNaser :Blod indeholder forskellige enzymer, herunder nukleaser, der kan nedbryde DNA, hvis de ikke hæmmes tilstrækkeligt. Natriumperchlorat virker som en hæmmer af DNaser, især dem, der kræver magnesium eller calcium for deres aktivitet. Det binder til disse metalioner og forhindrer dem i at deltage i enzymkatalyserede reaktioner og beskytter DNA'et mod nedbrydning.

2. Proteinudfældning :Natriumperchlorat bruges almindeligvis under proteinudfældningstrinnet i DNA-isolering. Det tilsættes til et cellelysat eller suspension for at inducere udfældning af proteiner, herunder hæmoglobin, som er rigeligt i røde blodlegemer. Den høje saltkoncentration skabt af natriumperchlorat forstyrrer opløseligheden af ​​proteiner, hvilket får dem til at aggregere og danne en pellet ved centrifugering. Dette gør det muligt for supernatanten, der indeholder DNA'et, at blive adskilt fra de præcipiterede proteiner.

3. Nukleinsyreudfældning :Natriumperchlorat kan også anvendes til at præcipitere nukleinsyrer, herunder genomisk DNA, fra supernatanten opnået efter proteinfældning. Det opnår dette ved at reducere opløseligheden af ​​DNA-molekyler. Når ethanol eller isopropanol tilsættes til supernatanten sammen med natriumperchlorat, bliver DNA'et uopløseligt og danner et synligt bundfald. Dette bundfald kan opsamles ved centrifugering og oprenses yderligere for at opnå rent genomisk DNA.

4. Fjernelse af forurenende stoffer :Natriumperchlorat hjælper med at fjerne forurenende stoffer såsom proteiner, andre makromolekyler og salte fra DNA-præparatet. Den høje saltkoncentration opnået med natriumperchlorat hjælper med effektiv udfældning af urenheder, hvilket efterlader renset DNA.

5. Optimering af DNA-udbytte og kvalitet :Anvendelsen af ​​natriumperchlorat i genomisk DNA-isolering kan optimere både udbyttet og kvaliteten af ​​det ekstraherede DNA. Ved effektivt at hæmme DNaser forhindrer det DNA-nedbrydning, hvilket sikrer integriteten og den høje molekylvægt af det isolerede DNA. Derudover forbedrer den effektive fjernelse af kontaminanter den overordnede renhed af DNA-præparatet, hvilket gør det velegnet til forskellige nedstrøms molekylærbiologiske anvendelser.

Samlet set spiller natriumperchlorat en afgørende rolle i genomisk DNA-isolering fra humant blod ved at hæmme DNaser, lette protein- og nukleinsyreudfældning, fjerne kontaminanter og forbedre kvaliteten og udbyttet af det isolerede DNA.