Trin-for-trin guide til at identificere ukendte bakterier i laboratoriet

Når du støder på et ukarakteriseret bakterieisolat, er en systematisk tilgang, der kombinerer mikroskopi, kultur og molekylære metoder, afgørende for nøjagtig identifikation.

1. Observer fysiske træk

Start med at undersøge cellevæggens sammensætning, form og hvordan celler hænger sammen efter deling. Disse grundlæggende egenskaber giver de første ledetråde om organismens taksonomi.

2. Påfør Gram-farven

Gram-farven adskiller bakterier med tykke peptidoglycan-vægge (Gram-positive) fra dem med tynde eller fraværende vægge (Gram-negative). Det er hjørnestenen i bakterieklassificering.

3. Undersøg morfologi

• Cocci – sfæriske celler.
• Baciller – lige stænger.
• Coccobacilli – korte, ovale stænger.
• Spirilla – stiv, spiralformet; altid gramnegativ.
• Spiroketter – fleksible, bevægelige spiraler; normalt gramneutral.
• Vibrios – kommaformet; Gram-negativ.

Bemærk, at hver form kan være Gram-positiv eller Gram-negativ, undtagen spirilla, som udelukkende er gramnegative.

4. Vurder cellekoblingsmønstre

Efter deling danner kokker og baciller karakteristiske arrangementer:

• Diplococci/Diplobaciller – par.
• Streptokokker/Streptobaciller – kæder.
• Tetrads – firkanter af fire cocci.
• Sarcinae – tern af otte cocci.
• Stafylokokker – druelignende klaser.

5. Kultur på selektive medier

Inokuler isolatet på en række vækstmedier, der favoriserer eller hæmmer specifikke bakteriegrupper. Observer koloniens morfologi, farve og væksthastighed for at indsnævre mulighederne.

6. Udfør biokemiske tests

Screen for metaboliske biprodukter (f.eks. oxidase, katalase, kulhydratfermentering) for yderligere at forfine identifikation. Mange laboratorier bruger automatiserede paneler for hastighed og nøjagtighed.

7. Bekræft med DNA-sekventering

Hvis morfologi og biokemiske data ikke er afgørende, kan 16S rRNA-sekventering eller helgenomanalyse definitivt matche isolatet med en kendt art eller afsløre en ny stamme, forudsat at referencegenomer eksisterer.

For eksempel kan et isolat, der er gramnegativt, aerobt og danner lige stangkæder, identificeres som Escherichia coli efter kultur- og sekventeringsbekræftelse.

Sergey Nazarov/iStock/GettyImages